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【qPCR】熒光定量PCR的熔解曲線,你了解多少?
發(fā)布時(shí)間:2025-04-15
熔解曲線探針?lè)ㄊ且环N利用特異性探針結(jié)合到目標(biāo)DNA序列上的技術(shù),通過(guò)監(jiān)測(cè)探針與目標(biāo)DNA結(jié)合狀態(tài)的溫度依賴性變化,來(lái)識(shí)別和定量特定的DNA或RNA序列。這種方法的關(guān)鍵在于探針與目標(biāo)序列匹配時(shí),其熔解溫度(Tm值)較高;而存在單核苷酸多態(tài)性(SNPs)或其他變異時(shí),Tm值會(huì)下降。通...
詳情
2022
4-12
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使用的基本步驟
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀技術(shù)的原理:體外核酸擴(kuò)增,加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs(脫氧核糖核苷三磷酸),Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復(fù)“變性→退火一引物延伸”過(guò)...
2022
4-6
程序降溫盒使用經(jīng)驗(yàn)分析
程序降溫盒的使用方法直都搞不明白,覺(jué)得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時(shí)間(細(xì)胞剛開(kāi)始還沒(méi)凍的時(shí)候就是室溫),然后把細(xì)胞放進(jìn)去,再一起移到-80度,這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢?時(shí)間使用長(zhǎng)了,感覺(jué)里面的液體是不是異丙醇啊,使用...
2022
3-23
三槽梯度PCR儀你真的了解嗎?
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱(chēng)之為梯度PCR儀。通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這...
2022
3-16
程序降溫盒使用小技巧
程序降溫盒在沒(méi)有酒精或任何液體的情況下,能確保在低溫冰箱中樣品的降溫速率為-1℃/分鐘。它們可以運(yùn)用于各種細(xì)胞類(lèi)型,包括干細(xì)胞,原代細(xì)胞和細(xì)胞系。這對(duì)于大多數(shù)需要培養(yǎng)的細(xì)胞系來(lái)說(shuō)是非常理想的。已經(jīng)通過(guò)干細(xì)胞,原代細(xì)胞和細(xì)胞系的使用,證明了提...
2022
3-10
迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法
迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項(xiàng)可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度,通過(guò)每列之間≥2°C的間隔溫度升降,使得可同時(shí)對(duì)于一系列的溫度進(jìn)行測(cè)試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個(gè)或更...
2022
3-1
三槽梯度PCR儀科普知識(shí)大全,你真不一定都懂
三槽梯度PCR儀溫度的準(zhǔn)確性可能會(huì)對(duì)PCR的成敗與否起決定性作用,因?yàn)镻CR的三個(gè)主要步驟都依賴于溫度。類(lèi)似地,加熱模塊上孔與孔之間的溫度一致性對(duì)于獲取可靠而可重復(fù)的PCR結(jié)果也是至關(guān)重要的。因此,所使用的PCR儀能在模塊之間準(zhǔn)確到達(dá)設(shè)定的...
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